动物组织/细胞RNA共提试剂盒 核酸提取
Tissue/Cell RNA/ miRNA /DNA Mini Kit（免氯仿）适用于从各种动物组织、细胞中同时提取出RNA/miRNA（包含miRNA的总RNA）、基因组DNA，提取全程不需要使用氯仿，得到包含miRNA的总RNA，不需要DNase I消化，可直接用于miRNA和mRNA的RT、RT-PCR、RT-qPCR、RACE、芯片、测序等。动物组织/细胞RNA共提试剂盒 核酸提取
Tissue/Cell RNA/ miRNA /DNA Mini Kit
动物组织/细胞 RNA/ miRNA/DNA 共提试剂盒
动物组织/细胞RNA共提试剂盒 核酸提取
目录号：91418
产品内容
产品成份 | 91418-50（50 次） |
裂解液 MRL Plus | 50 ml |
Wash Solution 1 | 12 ml（需加入指ding量无水乙醇） |
Wash Solution 2/3 | 10 ml（需加入指ding量无水乙醇） |
RNase-Free ddH2O | 5 ml |
抑制物去除液 IR | 25 ml |
漂洗液 WB | 13 ml（需加入指ding量无水乙醇） |
洗脱缓冲液 EB | 10 ml |
gDNA 吸附柱和收集管 | 50 套 |
RNA 吸附柱和收集管 | 50 套 |
RNase-Free 1.5ml 离心管 | 50 支 |
RNase-Free 2.0ml 液氮研磨管 | 50 支 |
自备试剂
无水乙醇
保存条件
室温（15 ~ 25℃）
产品简介
Tissue/Cell RNA/ miRNA /DNA Mini Kit（免氯仿）适用于从各种动物组织、细胞中同时提取出RNA/miRNA（包含miRNA的总RNA）、基因组DNA，提取全程不需要使用氯仿，得到包含miRNA的总RNA，不需要DNase I消化，可直接用于miRNA和mRNA的RT、RT-PCR、RT-qPCR、RACE、芯片、测序等。基因组 DNA 也可以直接用于下游的 Southern、酶切、PCR等各种试验。
du特的裂解液迅速裂解细胞和灭活细胞 RNase/DNase，然后裂解混合物 RNA/miRNA/ DNA 同时通过一个 gDNA 吸附柱，基因组 DNA 被吸附而 miRNA/RNA 穿透滤过。gDNA 吸附柱上的基因组 DNA 经过一系列漂洗、洗脱后得到纯净基因组 DNA。滤过的 RNA/miRNA，先用乙醇调节结合条件，然后转入 RNA 吸附柱，在高离序盐状态下选择性吸附于 RNA 吸附柱上，接着通过一系列快速的离心-漂洗-离心-洗脱，得到纯净的 RNA/miRNA（包含 miRNA 的总 RNA）。
注意事项
1. 采集 RNA 样本时，把新鲜组织样本浸入 RNAsafe (RNA 样品保存液，91115-100) 中，可在 37℃保存一天，在 25℃保存一周，在 4℃保存一个月，在-20℃或者–80℃长期保存。
2. 样品应避免反复冻融，否则会影响RNA的提取得率和质量。
3. 提取时，RNA在裂解液MRL Plus中时不会被RNase降解，但后续处理过程中应使用不含RNase的吸头和器皿。
4. 样品在加入裂解液 MRL Plus 并匀浆后，可在–80℃保存一个月以上。
5. Wash Solution 2/3 可能加入乙醇使用几天后，可能会出现沉淀晶体，并不影响使用，取其上清直接使用就可以。
重要提示：
① 第一次使用前, 请先在 Wash Solution 1、Wash Solution 2/3、漂洗液 WB 中加入指ding量无水乙醇，详见瓶上的标签。
② 所有离心步骤均需要在室温（15~25℃）下进行，提取效果更佳！
操作步骤
1. 动物组织：
a．电动匀浆：取新鲜组织10~20mg加入500μl裂解液MRL Plus，电动匀浆，直到无明显组织块即可。
b．液氮研磨：液氮研磨组织成细粉，取10~20mg组织细粉加入500μl裂解液MRL Plus，剧烈涡旋振荡，直到无明显粉末团即可。
c． 将裂解物 13,000 rpm 离心 3 min，沉淀不能裂解的碎片。
d．下接操作步骤 3。
2. 细胞
a. 悬浮细胞：离心收集细胞，加500μl裂解液MRL Plus（<8x106细胞）, 吹打混匀，剧烈涡旋振荡20sec，充分裂解。
b. 贴壁细胞：不需要消化，吸弃培养基后，直接在培养皿中加裂解液MRL Plus（每<8x106细胞加500μl裂解液MRL Plus）进行消化、裂解；或者，先用胰mei消化后离心收集细胞，然后加入裂解液MRL Plus，吹打混匀，剧烈涡旋振荡20sec，充分裂解。
c. 下接操作步骤 3。
3. 将裂解匀浆物（或离心得到的上清）全部加入gDNA吸附柱中（吸附柱放入收集管中），13,000 rpm 离心 1 min，基因组 DNA 被吸附在膜上，保留滤液（RNA/ miRNA/Protein 在滤液中）。
把gDNA吸附柱放入2.0ml离心管，置于4℃度，以备提取DNA用。
以下是 RNA/miRNA 的提取步骤：（包含 miRNA 的总 RNA）
4. 向滤液中加入 1.25 倍体积的无水乙醇，用移液器吹打混匀。
5. 每次转移≤750 μl滤液混合物至RNA吸附柱中，13,000 rpm离心1min，此时，RNA 被吸附在膜上，保留滤液，以备提取 Protein。
滤液中含有Protein，请转入一个合适大小（至少2倍滤液体积）的离心管，用于步骤 18开始的 Protein 提取。
6. 加入700μl Wash Solution 1（检查是否已加入乙醇），室温放置1 min, 13,000 rpm 离心30sec，倒弃滤液。
7. 加入500μl Wash Solution 2/3（检查是否已加入乙醇），13,000 rpm离心30sec，倒弃滤液。
8. 重复步骤 7。
9. 将RNA吸附柱放回空收集管中，13,000 rpm离心2min，除去膜上残留的乙醇。
10. 取出RNA吸附柱，放入RNase-free 1.5ml离心管中，向RNA吸附膜的中央部位悬空滴加30~50μl的RNase-free H2O，室温放置1min， 13,000rpm离心1min，管底即包含miRNA 的总RNA。
11. 得到RNA/miRNA，可直接用于下游实验，或于-70℃保存，以免降解。
以下步骤为提取 DNA 步骤：
12. 向步骤3的gDNA吸附柱中，加入500μl抑制物去除液IR，12,000 rpm离心30 sec，倒弃滤液。
13. 加700μl漂洗液WB（检查是否已加入乙醇），12,000 rpm离心30sec，倒弃滤液。
14. 加入500 μl漂洗液 WB，12,000rpm离心30 sec，倒弃滤液。
15. 将DNA吸附柱放回空收集管中，13,000rpm 离心2 min，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
16. 取出gDNA 吸附柱，放入新的1.5 ml的离心管中，向吸附膜的中央悬空滴加 100 μl 洗脱缓冲液 EB（洗脱缓冲液事先在 65~70℃水浴中预热效果更好），室温放置 3~5 min，12,000 rpm离心1 min。将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，室温放置 2 min，12,000 rpm离心1min。
17. 得到的DNA可以存放在2~8℃，如果要长时间存放，可以放置在- 20℃。
与 RNA 相关的产品：
71118-100 Script III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（for PCR or qPCR）
71710-100 Script III All-in-one RT Mix with dsDNase（for qPCR）
71600-500 2x Universal SYBR Green qPCR Mix (适用于所有qPCR仪)
与 miRNA 相关的产品：
71418-25 Script III miRNA 1st Stand Synthesis Kit（加尾法）
71419-500 Script III miRNA Real-Time PCR Assay kit（for qPCR，加尾法）
71613-500 Script III miRNA RT-qPCR Detection kit（71418-25 + 71419-500）
动物组织/细胞RNA共提试剂盒 核酸提取
