血清/血浆microRNA提取试剂盒
裂解液 RLS 是 RNAzol LS Reagent ( 同 Trizo LS ,是浓缩型的 Trizol )，配合 miRNA 专用的溶液体系，专用于从动物及人体血浆和血清中提取miRNA 和其它各种小 RNA(15-30 nt )。血清/血浆microRNA提取试剂盒
Serum/Plasma miRNA Mini Kit
血清/血浆 microRNA 快速提取试剂盒
血清/血浆microRNA提取试剂盒
目录号：91416
产品内容
产品成份 | 91416-50（50 次） |
裂解液 RLS | 50 ml |
Wash Solution 1 | 12 ml（需加入指ding量无水乙醇） |
Wash Solution 2/3 | 10 ml（需加入指ding量无水乙醇） |
RNase-Free ddH2O | 5 ml |
RNA 吸附柱和收集管 | 50 套 |
microRNA 吸附柱和收集管 | 50 套 |
RNase-Free 1.5ml 离心管 | 50 支 |
自备试剂
无水乙醇、氯仿
保存条件
室温（15 ~ 25℃）
产品简介
裂解液 RLS 是 RNAzol LS Reagent ( 同 Trizo LS ,是浓缩型的 Trizol )，配合 miRNA 专用的溶液体系，专用于从动物及人体血浆和血清中提取miRNA 和其它各种小 RNA(15-30 nt )。
可以提出来包含 miRNA 的总 RNA，用于 miRNA 的 RT、qPCR 检测，以及全转录组测序等；根据需要，也可以一次性把 miRNA 和总 RNA（mRNA、tRNA、rRNA）分别提出来。
近年来对 RNA 干扰和调节性小 RNA 的广泛研究迫切需要一种能有效提取 15-30 核苷酸左右大小 RNA（包括 siRNA 和 miRNA）的试剂盒。但是市场上常见的离心柱型的 RNA Kit/总 RNA Kit 不能有效吸附回收 miRNA，Trizol 抽提法也不能有效沉淀回收 miRNA（生物通上有专题文章阐述），对于血清血浆样本更是由于其自身特点更难提取。
产品特点
1. Serum/Plasma miRNA Mini Kit 质量优异，可以wan美替代 Qiagen 的miRNeasy Serum/Plasma Kit。
2. 本品可在常温下提取 RNA，不需要 4℃离心机；亦可以兼容 4℃离心机。
注意事项
1. 血液 RNA 的常温保存/运输/提取的简易方案：
临床取样：在临床上，使用抗凝管采血后，取 250 μl 新鲜血液，加入 750μl的裂解液 RLS ( RNAzol LS Reagent，Cat#R012-100)，用移液枪反复抽打并振荡混匀，在室温裂解 5~10 min，直至血细胞充分发生裂解。
保存：经裂解后的血液可在-20℃下保存 1-2 个月，在-70℃保存半年。
运输：可冰袋 4℃运输 1 天，干冰-20℃运输一周。
提取：后续 RNA 提取按 R213（或 R012）的说明书进行。
2. RNA 纯度及浓度检测：
血清/血浆的 RNA 含量特别低，已经低于分光光度计测量的下限，无法准确测量，因此无法通过测量 OD 值或者比值的方法来判断浓度或者纯度，只能通过下游做 RT-qPCR 来判断产量。同时无细胞的血清/血浆中的 RNA 主要是小于 100 nt 的 miRNA，因此跑电泳检测 RNA 完整性并不适用于血清/血浆 RNA。
3. Wash Solution 2/3 可能加入乙醇使用几天后，可能会出现沉淀晶体，并不影响使用，取其上清直接使用就可以。
具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准
操作步骤 （得到包含 microRNA 的总 RNA）
提示：
第一次使用前，请先在 Wash Solution 1、Wash Solution 2/3 中加入
无水乙醇，加入量详见瓶上的标签。
1. 每250μl液体样品 (血清，血浆，脑脊液等)，加入 750 μl 裂解液 RLS，用移液器反复抽打几次，然后剧烈震荡15sec，充分混匀。（液体样品和裂解液RLS的终体积比总是1：3）
注意：对于含有高污染物样品（如：高蛋白高血脂样品），可以适当减少处理量，用 RNase-free H2O 补足250μl后开始提取。
（例如：200μl样品+50μl RNase-free H2O + 750μl 裂解液 RLS。）
2. 将匀浆样品在室温下放置 5 min，使得核酸蛋白复合物wan全分离。
3. 加入 200μl 氯仿，剧烈振荡 15 秒，并在室温下放置 2 min，
4. 13,000 rpm 离心 10 min。样品会分成三层：上层无色的水相、中间层、下层有机相。RNA 存在于水相中，水相层的体积大约为所加裂解液 RLS体积的 70%。
5. 转移上清（约 450 μl）至一个新的离心管中，加入 1.5 倍体积（675 μl）的无水乙醇，吹打混匀。
6. 转移上清混合液（每次小于 750 μl，多则分 2 次）至 RNA 吸附柱中，12,000rpm 离心 1 min，倒弃滤液。
7. 向RNA吸附柱内加入 700 μl Wash Solution 1（检查是否已加入乙醇），12,000rpm离心1min，倒弃滤液。
8. 向 RNA吸附柱内加入 500 μl Wash Solution 2/3（检查是否已加入乙醇），12,000 rpm 离心 1 min，倒弃滤液。
9. 重复步骤 8 一次。
10. 将 RNA 吸附柱放回空收集管中，12,000 rpm 离心 2 min，除去膜上残留的乙醇。
11. 取出 RNA 吸附柱，放入新的 RNase-Free 1.5 ml 离心管中，向吸附膜的中央部位悬空滴加 30~50 μl 的 RNase-Free ddH2O，室温放置 1 min，12,000 rpm 离心 1 min，管底即包含 microRNA 的总 RNA。
12. 得到的 miRNA，可直接用于下游实验，或于-70℃保存，避免 RNA 降解。
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