果实/种子microRNA快速提取试剂盒
适用于提取果实、种子、中草药的总 RNA（包括 microRNA 的总 RNA），也可以一次性分别提取出 microRNA 和总 RNA（>200 nt）。果实/种子microRNA快速提取试剂盒
果实/种子 microRNA 快速提取试剂盒
FlashPure Fruit/Seed miRNA Mini Kit
果实/种子microRNA快速提取试剂盒
目录号：91400
产品内容
产品成份 | 91400-50（50 次） |
裂解液 FSL | 50 ml |
Wash Solution 1 | 12 ml（需加入指ding量无水乙醇） |
Wash Solution 2/3 | 10 ml（需加入指ding量无水乙醇） |
RNase-Free ddH2O | 5 ml |
gDNA 过滤器和收集管 | 50 套 |
RNA 吸附柱和收集管 | 50 套 |
RNase-Free 1.5ml 离心管 | 50 支 |
RNase-Free 2.0ml 液氮研磨管 | 50 支 |
自备试剂
无水乙醇
保存条件
室温（15 ~ 25℃）
产品简介
市场上常见的离心柱型的 RNA Kit/总 RNA Kit，不能有效吸附回收miRNA；Trizol 抽提法也不能有效沉淀回收全部 miRNA（生物通上有专题文章阐述）。
适用于提取果实、种子、中草药的总 RNA（包括 microRNA 的总 RNA），也可以一次性分别提取出 microRNA 和总 RNA（>200 nt）。
FlashPure Fruit/Seed miRNA Mini Kit 是糖酚含量巨丰富、次级代谢产物巨多的果实、种子、中草药等样本 microRNA 提取的zui jia选择，还可以提取绝大多数复杂植物如棉花、杨树、冬青、月季、丹参等 microRNA，当然本试剂盒也适用于拟南芥、水稻、小麦、烟草、水稻等各种简单样品。
产品特点
本公司生产的 FlashPure Fruit/Seed miRNA Mini Kit 质量优异，解决了很多果实、种子、中草药等复杂植物 miRNA 难以成功提取的世纪难题。
注意事项
1. 如果 FSL 有析出或者沉淀，请将其置于 65℃水浴中，重新溶解后使用。
2. Wash Solution 2/3 加入乙醇使用几天后，可能出现沉淀晶体，并不影响使用，取其上清使用即可。
3. 所有离心步骤均需要在室温（15~37℃）下进行。
4. 样品应避免反复冻融，否则会影响 RNA 的提取得率和质量。
具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准
操作步骤：
重要提示：
① 第一次使用前，请先在 Wash Solution 1、Wash Solution 2/3 中加入无水乙醇，加入体积详见瓶上的标签。
② 操作前，取 1 ml 裂解液 FSL 至 2 ml 离心管中，加入 5%的 β-巯基乙醇（例如 1 ml FSL 加 50 μl β-巯基乙醇），颠倒混匀后，65°C 水浴预热。
多个样本请按比例放大。
③ β-巯基乙醇是裂解液 FSL 的关键成分，必要的时候，可以提高终浓度到10~20%，来防止样品褐化。如果碰到特别复杂的植物，可以尝试在裂解液中再加入 PVP40 至终浓度 2%。
1. 材料处理：
a．在液氮中研磨植物组织成细粉，转移 30～200 mg 细粉至 65℃预热的裂解液 FSL（已加有 β-巯基乙醇）中，立即剧烈涡旋震荡 30 Sec，充分混匀。
注意：水分多的样品（如草莓、西瓜果肉）投入 150～200 mg；水分含量少的样品（如成熟的小麦/玉米/大豆种子）投入 30～40 mg；淀粉含量高的块茎投入 40～80mg；叶片投入 50～100 mg。
b．短暂回放至 65℃水浴 5 min，中间偶尔颠倒 1-2 次，帮助裂解。
c． 将裂解物13,000rpm离心5～10min，沉淀不能裂解的碎片。
d．转移上清有 800～900 μl。
2. 小心吸取 600 μl 裂解物上清转入一个 gDNA 过滤器中（过滤器放入收集管中），13,000 rpm 离心 1 min，保留滤液（RNA 在滤液中），并把滤液转移至一个 RNase-Free 离心管中，备用。 把 gDNA 过滤器放入空收集管，再把剩余的上清转入 gDNA 过滤器，再次 13,000 rpm 离心1 min，保留滤液备用。
3. 向两管滤液中分别加入 1.25 倍体积的无水乙醇 (例如：600 μl 滤液加750 μl 无水乙醇)，吹打混匀。
4. 每次转移≤750 μl滤液混合液至RNA吸附柱中，13,000 rpm离心1min，此时 RNA 被吸附在膜上，倒弃滤液。重复此过程，直到溶液全部上柱。
5. 加入 700 μl Wash Solution 1（检查是否已加入乙醇!），室温放置 1 min,13,000 rpm 离心 30 sec，弃滤液。
6. 加入 500 μl Wash Solution 2/3（请检查是否已加入无水乙醇!），13,000 rpm 离心 30 sec，弃滤液。
7. 重复步骤 6。
8. 将 RNA 吸附柱放回空收集管中，13,000 rpm 离心 2 min，除去膜上残留的乙醇。
9. 取出 RNA 吸附柱，放入一个 RNase-free 1.5 ml 离心管中，向吸附膜的中央悬空滴加 30～50 μl 的 RNase-free H2O，室温放置 1 min，13,000 rpm 离心 1 min，管底即包含 miRNA 的总 RNA。
10. 提取的 RNA，可直接用于下游实验，或于-70℃保存，以免降解。
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