骨组织总RNA快速提取试剂盒(带gDNA过滤器）
本产品适用于快速提取骨组织细胞的总 RNA，利用多年研制而成的骨组织专用裂解液，并添加多种成分去除骨组织蛋白多糖，采用高效的 gDNA 过滤器，不需要繁琐的 DNase I消化，提取的 RNA，可直接用于 RT、RT-PCR、RACE、RT-qPCR、普通转录组测序、芯片等。骨组织总RNA快速提取试剂盒(带gDNA过滤器）
FlashPure Bone Total RNA Mini Kit
骨组织 RNA 快速提取试剂盒(带 gDNA 过滤器)
骨组织总RNA快速提取试剂盒(带gDNA过滤器）
目录号：91514
产品内容
产品成份 | 91514-50（50 次） |
裂解液 FSL | 50 ml |
Boneaid | 5 ml |
裂解液 PRL Plus | 25 ml |
去蛋白液 RW1 | 40 ml |
漂洗液 RW | 10 ml（需加入指ding量无水乙醇） |
RNase-Free H2O | 5 ml |
gDNA 过滤器和收集管 | 50 套 |
RNA 吸附柱和收集管 | 50 套 |
RNase-Free 1.5ml 离心管 | 50 支 |
RNase-Free 2.0 ml 液氮研磨管 | 50 支 |
自备试剂
无水乙醇
保存条件
室温（15~25℃），有效期 12 个月。
产品简介
骨组织坚硬、骨细胞密度低、而且外周基质含有大量黏蛋白（蛋白多糖）和RNA难以分离，无法用传统Trizol法进行高质量提取。
本产品适用于快速提取骨组织细胞的总RNA，利用多年研制而成的骨组织专用裂解液，并添加多种成分去除骨组织蛋白多糖，采用高效的gDNA过滤器，不需要繁琐的DNase I消化，提取的RNA，可直接用于RT、RT-PCR、RACE、RT-qPCR、普通转录组测序、芯片等。
产品特点
1. 高质：28s/18s=2:1，OD260/280=2.0～2.2！
2. 高效：提取全过程仅需 30min！
注意事项
1. 如果 FSL 有析出或者沉淀，请将其置于 65℃水浴中，重新溶解后使用。
2. 样品应避免反复冻融，否则会影响 RNA 的提取得率和质量。
具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准
操作步骤：
提示：
① 第一次使用前请先在漂洗液RW中加入无水乙醇，加入量详见瓶身标签。
② 操作前，取1ml裂解液FSL至2.0ml离心管内，加入10%的Boneaid，
（例如：1ml FSL 加100μl Boneaid），颠倒混匀后，65℃水浴中预热。
多个样本按比例放大。
③ 所有离心步骤均需要在室温（15℃～25℃）下进行。
1. 液氮研磨法：
a．用骨qian夹碎骨组织，放入研钵（研钵在 180 度干烤 2 小时），在液氮中反复研磨成细粉。
注意：研磨时，要不断补加液氮，保证样本的研磨在液氮中进行。
b．转移 100 mg 细粉至 65℃预热的裂解液 FSL（已加有 Boneaid）中，立即剧烈涡旋震荡 30 Sec，充分混匀。
c．下接步骤 3。
2. 其它骨组织破碎方法：
a． 取100mg骨组织加入1 ml预热的裂解液FSL（已加有 Boneaid）， 高速均质仪粉碎匀浆。或者取 100 mg 液氮冷冻包埋切片粉碎的骨头加入 1 ml 裂解液 FSL（已加有 Boneaid）粉碎匀浆。
b． 下接步骤 3。
3. 短暂回放至 65℃水浴 10 min，中间偶尔颠倒 1～2 次，帮助裂解。
4. 将裂解物 13,000 rpm 离心 5 ~10 min，沉淀不能裂解的碎片。
5. 转移上清至一个新的 2.0 ml 离心管中，加入 0.5 倍上清体积的无水乙醇，吹打混匀。
6. 每次转移≤750 μl 上清混合液至 gDNA 过滤器中（过滤器放入收集管），13,000 rpm 离心 2 min，倒弃滤液。此时，绝大部分 gDNA 被滤除，RNA 和少量 gDNA 残留被吸附在膜上，重复此过程，直到混合液全部转入 gDNA 过滤器。
7. 取出步骤 6 的 gDNA 过滤器，放入一个新的 2.0 ml 离心管中，加入500 μl 裂解液 PRL Plus，13,000 rpm 离心 1 min，收集滤液（RNA 在滤液中），向滤液中加入 250μl 无水乙醇，吹打混匀。
8. 将滤液混合物加入 RNA 吸附柱中，13,000 rpm 离心 2 min，倒弃滤液。此时，RNA 被吸附在膜上。
9. 加入 700 μl 去蛋白液 RW1，室温放置 1min，13,000 rpm 离心 30 sec，倒弃滤液。
10. 加入 500 μl 漂洗液 RW，13,000 rpm 离心 30 sec，倒弃滤液。
11. 重复步骤 10 一次。
12. 将 RNA 吸附柱放回空收集管中，13,000 rpm 离心 2 min，除去膜上残留的乙醇。
13. 取出 RNA 吸附柱，放入 RNase-free1.5 ml 离心管中，向 RNA 吸附膜的中央悬空滴加 30~50 μl 的 RNase-free H2O，室温放置 1 min，13,000 rpm 离心 1 min。
14. 提取的总RNA，可直接用于下游实验，或于-70℃保存，以免降解。
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