石蜡包埋组织总RNA提取试剂盒带gDNA过滤器
适用于快速从福尔马林固定、石蜡包埋组织样品中提取总RNA，提取的RNA，可用于RT，RT-PCR，RT-qPCR，普通转录组测序、RACE等。石蜡包埋组织总RNA提取试剂盒带gDNA过滤器
FlashPure FFPE Total RNA Mini Kit
石蜡包埋组织总 RNA 快速提取试剂盒
石蜡包埋组织总RNA提取试剂盒带gDNA过滤器
目录号：91310
产品内容
产品成份 | 保存 | 91310-50（50 次） |
裂解液 PKD | 室温 | 15 ml |
结合液 RBC | 室温 | 25 ml |
漂洗液 RW | 室温 | 10 ml（需加入指ding量无水乙醇） |
RNase~Free H2O | 室温 | 10 ml |
蛋白酶 K（40mg/ml） | ~20℃ | 20 mg |
gDNA 过滤器和收集管 | 室温 | 50 套 |
RNA 吸附柱和收集管 | 室温 | 50 套 |
RNase~Free 1.5 ml 离心管 | 室温 | 50 支 |
自备试剂
无水乙醇、二甲苯
保存条件
室温（15 ~ 25℃）
产品简介
适用于快速从福尔马林固定、石蜡包埋组织样品中提取总RNA，提取的RNA，可用于RT，RT-PCR，RT-qPCR，普通转录组测序、RACE等。
产品特点
1. 高质：28s/18s=2:1，OD260/280=2.0～2.2！
2. 高效：提取全过程仅需 30 min！
具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准
操作步骤
第一次使用前，请先在漂洗液 RW 和 70%乙醇中加入指ding量无水乙醇，详见瓶身的标签。
提示：所有离心步骤必须在室温（15~25℃）下进行。
1. 修整去除过量包埋组织外石蜡，并切成 5~20 μm 厚切片，开始的 2~3片抛弃不用。
2. 收集总厚度不超过■40 μm 的石蜡切片到一个 2.0 ml 离心管中（例如：2 片 20μm、4 片 10μm、8 片 5μm 的石蜡切片），或者不超过▲80 μm的石蜡切片到一个 2.0 ml 离心管中。
■代表处理切片总厚度≤40 μm，▲代表处理切片总厚度≤80 μm
3. 加入 1 ml 100%二甲苯，涡旋振荡 10 sec。瞬间离心把组织全部浸入到二甲苯。
4. 50℃水浴 3 min 熔解石蜡，20~25℃最高速离心 2 min，收集到管底。
5. 小心吸弃上清二甲苯，注意不要吸到沉淀。
6. 加入 1 ml 无水乙醇，涡旋振荡，最高速离心 2 min，小心吸弃上清乙醇。
7. 加入 1ml 无水乙醇，重复步骤 6 一遍，尽可能吸弃所有乙醇。
8. 室温或者 37℃晾干乙醇 10 min，或直到所有乙醇挥发干。
乙醇wan全晾干非常重要，微量的乙醇残留也会导致 RNA 产量降低。
9. 加入■150 μl ▲240 μl 裂解液 PKD，涡旋振荡（或者吹打），充分重悬组织沉淀，短暂离心收集液体到管底，加入 10 μl 蛋白酶 K，吹打混匀。
10. 55℃孵育 15min，然后 80 ℃孵育 15min。
55℃孵育后，可以将离心管取出放置在室温，等水浴锅温度升到 80℃后再放入水浴锅，精确的孵育 15min。即使 2min 的延长也可能导致 RNA的部分降解。
11. 加入■320 μl ▲500 μl 结合液 RBC，充分吹打混匀，调节结合条件。
12. 转移混合液至 gDNA 过滤器中，14,000 rpm 离心 30 sec，收集滤液（RNA 在滤液中）。
应避免吸到较大的未消化wan全的絮团物质上柱，以免堵塞离心柱。
13. 加入■720 μl ▲1200 μl 无水乙醇到滤过液中，吹打混匀。
14. 将≤750 μl 滤液混合液加入 RNA 吸附柱中，13,000 rpm 离心 30 sec，倒弃滤液。此时，RNA 被吸附在膜上。重复此过程，直到溶液全部上柱。
15. 加入 500 μl 漂洗液 RW，13,000 rpm 离心 30 sec，倒弃滤液。
16. 重复步骤 15 一次。
17. 将RNA吸附柱放回空收集管中，13,000rpm离心 2 min，除去乙醇。
18. 取出 RNA 吸附柱，放入 RNase~free1.5 ml 离心管中，向 RNA 吸附膜的中央悬空滴加 30 μl 的 RNase~free H2O，室温放置 1 min，13,000 rpm 离心 1 min。
19. 提取的总 RNA，可直接用于下游实验，或于~70℃保存，以免降解。
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