超纯全血总RNA快速提取试剂盒
适用于快速提取新鲜血液的总RNA，RNA可直接用于RT，RT-PCR，RT-qPCR，普通转录组测序、RACE等。超纯全血总RNA快速提取试剂盒
FlashPure Blood Total RNA Mini Kit
超纯全血总 RNA 提取试剂盒（离心柱型）
超纯全血总RNA快速提取试剂盒
目录号：91215
产品内容
产品成份 | 91215-50（50 次） |
10X 红细胞裂解液 RLB | 25 ml |
裂解液 RL | 50 ml |
去蛋白液 RE | 25 ml |
漂洗液 RW | 10 ml（需加入指ding量无水乙醇） |
70%乙醇 | 9 ml（需加入指ding量无水乙醇） |
RNase-Free H2O | 10 ml |
RNA 吸附柱和收集管 | 50 套 |
RNase-Free 1.5ml 离心管 | 50 支 |
自备试剂
无水乙醇、β-巯基乙醇
保存条件
室温（15 ~ 25℃）下，存放 12 个月，不影响使用效果。
产品简介
适用于快速提取新鲜血液的总RNA，RNA可直接用于RT，RT-PCR，RT-qPCR，普通转录组测序、RACE等。
产品特点
1. 高质：28s/18s=2:1，OD260/280=2.0～2.2！
2. 高效：提取全过程仅需 20 min！
操作步骤
提示：
①所有离心步骤均需要在室温（15 ~37℃）下进行。
②第一次使用前，请先在漂洗液 RW 和 70%乙醇中加入指ding量无水乙醇。
③操作前，先用 RNase-Free H2O 将 10X 红细胞裂解液 RLB 稀释到 1X。
1. 在适合大小的 RNase free 离心管中加入 1 体积（0.5-1 ml）各种抗凝剂新鲜血液 (先颠倒混匀后)和 3 体积的红细胞裂解液 RLB，颠倒混匀，可轻弹管壁，确保混匀。
2. 室温放置 10 分钟（期间应该颠倒轻弹混匀数次帮助裂解红细胞）。
注意：如果 RNA 降解严重，可在冰上裂解，时间可以长一些以充分裂解。
3. 12,000 rpm 离心 20 秒，倒弃红色上清，并小心的尽可能多的吸弃上清
（注意不要吸到管底的细胞团），留下完整的管底白细胞团。
注意：离心后在管底应该见到白色的白细胞团，也可能有一些红细胞残片和白细胞团在一起，但是如果看到的是大部分的红色细胞团，说明红细胞裂解很不充分，应该再加入红细胞裂解液，重悬后重复步骤 2，3。
注意：上清尽可能che底吸弃，残留过多会稀释裂解液，造成裂解异常，产量纯度降低。
4. 涡旋或者轻弹管壁将白细胞沉淀wan全松散重悬，加入 1 ml 裂解液 RL，用移液枪反复吹打，充分裂解细胞。
5. 将匀浆样品剧烈震荡混匀，在室温（15 -30℃）条件下孵育 5 min，使得核酸蛋白复合物wan全分离。
6. 每1 ml裂解液 RL 加 0.2 ml 氯仿，盖紧样品管盖，剧烈振荡 15 sec，并在室温下放置2min。
7. 12，000rpm 离心 10 min，样品会分成三层：下层有机相，中间层和上层无色的水相，RNA 存在于水相中。水相层的容量大约为所加 RL 体积的 60%，把水相转移到新管中，进行下一步操作。
8. 向水相中加入等体积 70%乙醇，吹打混匀。
9. 每次转移≤700 μl 水相混合物至一个 RNA 吸附柱中（吸附柱放入收集管中），13,000 rpm 离心1 min，RNA 被吸附在膜上，弃滤液。重复此过程，直到溶液全部上柱。
10. 加500μl去蛋白液 RE，室温放置 1 min，13,000 rpm 离心 30 sec，弃滤液。
11. 加入500μl漂洗液RW，13,000 rpm 离心 30 sec，弃滤液。
12. 重复步骤 11。
13. 将 RNA 吸附柱放回收集管中，13,000 rpm 离心 2 min，che底除去膜上残留的乙醇。
14. 取出 RNA 吸附柱，放入一个新的 1.5 ml RNase - free 离心管中，向吸附膜的中央部位悬空滴加30-50μl RNase free H2O（事先在70-90℃水浴中加热可提高产量），室温放置1min，13,000 rpm 离心1 min，管底即是RNA溶液。
15. 提取的RNA可直接用于下游实验，或于-70℃保存，避免 RNA 降解。
相关产品：
71118-100 Script III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（for PCR or qPCR）
71710-100 Script III All-in-one RT Mix with dsDNase（for qPCR）
71600-500 2x Universal SYBR Green qPCR Mix (适用于所有qPCR仪)
超纯全血总RNA快速提取试剂盒
