动物组织/细胞/昆虫总RNA快速提取试剂盒
适用于快速提取各种动物组织、细胞、昆虫的总RNA，gDNA过滤器高效滤除gDNA，RNA可直接用于RT，RT-PCR，RT-qPCR，普通转录组测序、RACE 等。动物组织/细胞/昆虫总RNA快速提取试剂盒
FlashPure Plus Tissue/Cell/Insect Total RNA Mini Kit 动物组织/细胞/昆虫总 RNA 提取试剂盒（带 gDNA 过滤器）
动物组织/细胞/昆虫总RNA快速提取试剂盒
目录号：91218
产品内容
产品成份 | 91218-50（50 次） |
裂解液 ARL Plus | 30 ml |
去蛋白液 RW1 | 40 ml |
漂洗液 RW | 10 ml（需加入指ding量无水乙醇） |
70%乙醇 | 9 ml（需加入指ding量无水乙醇） |
RNase-Free H2O | 10 ml |
gDNA 过滤器和收集管 | 50 套 |
RNA 吸附柱和收集管 | 50 套 |
RNase-Free 1.5 ml 离心管 | 50 支 |
RNase-Free 2.0 ml 液氮研磨管 | 50 支 |
自备试剂
无水乙醇
保存条件
室温（15~25℃），有效期 12 个月。
产品简介
适用于快速提取各种动物组织、细胞、昆虫的总RNA，gDNA过滤器高效滤除gDNA，RNA可直接用于RT，RT-PCR，RT-qPCR，普通转录组测序、RACE 等。
产品特点
1. 无毒：免氯仿、免β-巯基乙醇！
2. 高质：28s/18s=2:1，OD260/280=2.0～2.2！
3. 高效：提取全过程仅需 10 min！
重要提示：
① 第一次使用前，请先在漂洗液RW中加入无水乙醇，详见标签。
② 所有离心步骤均需要在室温（15~37℃）下进行。
③ 高丰度样本（肝脏、脾脏、肾脏、胰腺、心脏）的投入量减半。
操作步骤：
1. 动物组织、昆虫：
a．电动匀浆：取新鲜组织 10~20 mg 加入 350μl的裂解液ARL Plus，电动匀浆，直到无明显组织块即可。
b．液氮研磨：在液氮中研磨组织成细粉，取10~20 mg组织细粉加入350μl裂解液ARL Plus，剧烈涡旋振荡20sec，充分裂解。
注意：裂解 20~30 mg 组织，需要加入 600 μl 裂解液 ARL Plus。
c． 将匀浆后裂解物13，000 rpm 离心3min。
d．下接步骤 3。
2. 细胞
a．悬浮细胞：收集<107悬浮细胞到一个 1.5ml 离心管；
贴壁细胞（培养皿培养）：wan全吸弃培养基后，直接在培养皿中加入裂解液ARL Plus进行消化、裂解；
贴壁细胞（细胞瓶培养）：应该先用胰蛋白mei消化后吹打下来收集。
b．13,000rpm 离心10sec，wan全吸弃上清，留下细胞团。
c．轻弹管底使细胞松散，然后加入350μl（<5x106 细胞）或600μl（5x106-1x107细胞）裂解液ARL Plus，涡旋振荡，充分混匀。
d．下接步骤 3。
贴壁细胞培养数量表：（细胞数量＞1x107，请酌情增加裂解液的用量）
培养器皿 | 面积（cm2） | 培养液量 （ml） | 细胞数量 |
96 孔培养板 | 0.32 | 0.1 | 105 |
24 孔培养板 | 2 | 1.0 | 5×105 |
12 孔培养板 6 孔培养板 3.5cm 培养皿 | 4.5 9.6 8 | 2.0 2.5 3.0 | 106 2.5×106 2×106 |
6cm 培养皿 | 21 | 5.0 | 5.2×106 |
9cm 培养皿 | 49 | 10.0 | 1.22×107 |
25cm 培养瓶 75cm 培养瓶 100cm 玻璃培养瓶 | 25 75 33 | 5.0 15～30 10 | 5×106 2×107 7x 106 |
3. 将裂解物上清或者裂解物全部加到gDNA 过滤器上（过滤器放在收集管内），立刻 13,000 rpm 离心1 min，保留滤液（RNA 在滤液中）。
4. 向滤液中加入等体积（350μl/600μl）的70%乙醇，吹打混匀。
5. 每次吸取≤750μl滤液混合物转入一个RNA吸附柱中（吸附柱放入收集管中），13,000 rpm离心1min，倒弃滤液。此时，RNA被吸附在膜上，重复此过程，直到溶液全部上柱。
6. 加入700μl去蛋白液 RW1,室温放置 1min,13,000 rpm 离心30sec，倒弃滤液。
7. 加入500μl漂洗液 RW，13,000 rpm 离心30sec，倒弃滤液。
8. 重复步骤7。
9. 把RNA吸附柱放回收集管中，13,000rpm 离心2min，che底除去膜上的乙醇。
10. 取出RNA吸附柱，放入一个RNase-free 1.5ml离心管中，向吸附膜的中央部位悬空滴加30-50μl RNase-Free H2O，室温放置1min，13,000rpm离心1min。
11. 得到的RNA，可直接用于下游实验，或于-70℃保存，以免降解。
附录：
一、免液氮直接研磨（自动研磨仪）——适用于新鲜样本
a. 在2.0ml 液氮研磨管中加入4mm两粒，加600μl裂解液ARL plus，放进20mg左右的样本，设置65个频率，震荡2min。
b. 将裂解物13,000rpm离心3min，沉淀不能裂解的碎片。
二、液氮研磨（自动研磨仪）:
a. 把研磨模块丢到液氮中预冷，直到没有气泡冒出视为预冷完毕。
b. 在2.0ml液氮研磨管中放入3mm钢珠3粒，放进20-30mg 样本，投入液氮中预冷。
c. 把预冷好的离心管插入研磨模块中，放进研磨仪，设置 55 个频率，震荡30~60sec。（以北京赫得研磨仪——京 N9548 为例）
d. 研磨完成后，马上加600μl裂解液ARL Plus，剧烈涡旋振荡,充分混匀。
e. 将裂解物13,000rpm离心3min，沉淀不能裂解的碎片。
相关产品：
71118-100 Script III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（for PCR or qPCR）
71710-100 Script III All-in-one RT Mix with dsDNase（for qPCR）
71600-500 2x Universal SYBR Green qPCR Mix (适用于所有qPCR仪)
动物组织/细胞/昆虫总RNA快速提取试剂盒
