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NobleRyder RIPA裂解液(强,无抑制剂)

  • 型   号:P4833
  • 价   格:
  • 更新时间:2024-09-26
  • 厂家性质:经销商

NobleRyder RIPA裂解液(强,无抑制剂) 即用型液体试剂 P4833-100ml

NobleRyder RIPA裂解液(强,无抑制剂) 

品简介:

   多种成分均可以从细胞中提取总蛋白,例如Triton、SDS、NP-40等。RIPA裂解液(强)(Enhanced RIPA lysis buffer ,without inhibitors)是采用一种经典的细胞组织快速裂解,并获得总蛋白的裂解液,其裂解强度大于NP-40裂解液、RIPA裂解液(中)。所获得的蛋白质可以用于Western,免疫沉淀(Immunol Precipitation,IP)等。

    Enhanced RIPA lysis buffer without inhibitors 主要由Tris、NP-40、sodium deoxycholate等组成,不含蛋白酶和磷酸酶抑制剂,并维持原有的蛋白间相互作用。

产品组成: 

编号

名称

P4833

Storage

Enhanced RIPA lysis buffer without inhibitors

100ml

-20℃

使用说明书

1份

 

 

操作步骤(仅供参考): 

(一)贴壁培养细胞

1、取Enhanced RIPA lysis buffer室温溶解混匀,根据需要选择添加或不添加抑制剂。

2、去除贴壁细胞的培养液,用PBS、NS或无血清培养液清洗1次,低速离心,弃上清,留取沉淀。

3、按照 6 孔板每孔加入150~250μl含有PMSF的裂解液的比例, 加入 RIPA Lysis Buffer  。移液器轻轻吹打,使裂解液和细胞充分接触。置于冰上或4℃裂解15~30min,通常裂解液作用于细胞 1~3 秒内,细胞就会被裂解。通常 6 孔板每孔细胞加入 150μl裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200~250μl。

4、10000~12000g,4℃离心5~10min(如无低温离心机,室温下离心亦可),取上清。

5、进行后续的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

(二)悬浮培养细胞

1、取 Enhanced RIPA Lysis Buffer室温溶解混匀,根据需要选择添加或不添加抑制剂。

2、低速离心悬浮细胞,弃上清,收集沉淀。

3、用手指轻弹细胞,使其松散。按照 6 孔板每孔细胞加入 150~250μl裂解液的比例,加入 Enhanced  RIPA Lysis Buffer。通常 6 孔板每孔细胞加入 150μl裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到 200~250μl。再用手指轻弹以充分裂解细胞,充分裂解后应没有明显的细胞沉淀

4、 10000~12000g,4℃离心 5~10min(如无低温离心机,室温下离心亦可),取上清。

5、  进行后续的 SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

(三)组织样本

1、取 Enhanced Lysis Buffer  置于室温溶解混匀,根据需要选择添加或不添加抑制剂。

2、把组织jian切成细小的碎片,越小越好。取在液氮或超低温冰箱中冷冻 30min 以上的组织,迅速用液氮研磨,研磨过程尽量控制在1~2min 之内,以减少蛋白的降解。

3、按照每20mg组织加入 150~250μl 裂解液的比例加入含有 PMSF 的裂解液。冰上或 4℃裂解 15-30min。

4、步骤 3、4 亦可以采用如下过程:按照每 20mg 组织加入 150~250μl 裂解液的比例加入含有 PMSF 的 Enhanced  RIPA Lysis Buffer。用玻璃匀浆器或组织研磨器匀浆,直至充分裂解,该过程尽量控制在 1~2min 之内,以减少蛋白的降解。

5、10000~12000g,4℃离心 5~10min(如无低温离心机,室温下离心亦可),取上清。

6、进行后续的 PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

注意事项:

1、去除贴壁细胞的培养液后,如果血清中的蛋白没有干扰,可以不用清洗。

2、如果裂解不充分可以适当增加裂解液的用量,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。

3、如果细胞量较多,必需分装成 50~100 万细胞/离心管,然后再裂解。大团的细胞较难裂解充分,而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触,相对比较容易裂解充分。

4、如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈 Vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。

5、溶解RIPA Lysis Buffer 时,应尽量缩短溶解时间,避免有效成分失效。

6、裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物,属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA 等的复合物。在不检测和基因组 DNA 结合特别紧密的蛋白的情况下,可以直接离心取上清用于后续实验;如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物,随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子,例如 NF-KB、p53 等时,通常不必进行超声处理,就可以检测到这些转录因子。

7、  细胞裂解的操作步骤,应置于冰上或 4℃进行。 

有效期:12个月有效。

NobleRyder RIPA裂解液(强,无抑制剂) 

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