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Western blotting检测试剂盒(DAB) NobleRyder P0910

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  • 更新时间:2024-08-28
  • 厂家性质:经销商

北京诺博莱德科技有限公司供应Western blotting检测试剂盒(DAB) NobleRyder P0910量大优惠,咨询 :

 

 

 

 

 

北京诺博莱德科技有限公司供应Western blotting检测试剂盒(DAB) NobleRyder P0910量大优惠,咨询 :      1215878164

  

P0910

Western blotting(小鼠IgG)DAB检测试剂盒

920

P0920

Western blotting(兔IgG)DAB检测试剂盒

920

P0930

Western blotting(山羊IgG)DAB检测试剂盒

920

试剂盒组成
1. 封闭试剂:30g(可配制400ml)脱脂奶粉及其他蛋白,缓冲盐等混合物。
2. 10倍浓缩抗体稀释液,
50ml
3. HRP标记二抗,
0.5ml,效价1400
4. DAB显色液(
20×),5ml A+5ml B

原理:

SDS-PAGE电泳后,蛋白质按照分子量大小分离,转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)后,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶标记的第二抗体起反应,经过底物显色以检测电泳分离的特异性的蛋白。

操作步骤:

常规电泳转膜后,
1) 清洗转印膜:将膜剥离下后,作好标记,一般在左上角剪一缺口。室温用TBS-T漂洗3次每次5min,以尽量洗去转印膜上的SDS,防止影响后面的抗体结合。
2) 5g封闭试剂加100ml双蒸水计,配制膜封闭液,配好的膜封闭液为乳白色悬液,将漂洗过的转印膜,封闭液内,摇床震动,室温封闭30min A@ 3) TBS-T PH7.6洗液,室温漂洗3次每次5min
3)将10×抗体稀释液用双蒸水稀释成1×(10ml 10×抗体稀释液加入90ml双蒸水,混匀,可4℃保存三个月。此稀释液可作为一抗和二抗的稀释液。
4
)用1×的抗体稀释液稀释抗体。根据用量以及一抗的推荐稀释浓度来稀释一抗。将杂交膜放入杂交袋中,加入一抗工作液,封口,4孵育过液或37摇动孵育2h。此用过的抗体一般可回收第二天再使用一次。注:如果所加一抗不同,可在此步将膜沿电泳方向剪成条,分别作好标记,分开孵育。
5)用TBS-T PH7.6洗液,室温漂洗3次每次5min
6)用稀释好的抗体稀释液稀释抗体。根据用量,按10ml抗体稀释液加入10ulHRP标记二抗的比例,配制二抗工作液。将杂交膜放入杂交袋中,加入加入二抗工作液,封口,4孵育过液或37摇动孵育2h。此用过的抗体一般可回收第二天再使用一次。
7)用TBS-T PH7.6洗液,室温漂洗3次每次10min
8)配制DAB显色:根据用量,取TBS-T  4ml,加入DAB显色液ADAB显色液B200ul,混匀,加在膜正面,室温下显色。在目标条带显出后,而且背景未出时,放入水中终止显色。

注意事项:
1,   请根据一抗来源选择试剂盒。括号里面代标一抗的来源而不是标本的来源。
2,   western blotting DAB显色法操作简单,但其敏感性与ECL发光发有一定的差距,一般只适用于丰度较高的蛋白。
3,   可以根据显色结果来优化实验反应时间。如背景过深,可延长膜封闭时间,加长zui终漂洗次数与时间。如果条带过弱,可延长抗体孵育时间。
4,   如果*没有条带,请检查前期蛋白处理及实验过程, 如果确认无误,反复两次依旧无结果,请换用ECL发光法显色。
5,   TBS-T0.01M)配制方法:称取NaCl 8.5g Tris 1.21g ,用800ml的双蒸水溶解,用盐酸调PH7.6,再加入0.5ml Tween20,用双蒸水 加至1000ml,混匀即可。(也可按照自己的配制习惯来配制)

 

北京诺博莱德科技有限公司位于北京市海淀区,是一家专业从事生化试剂、分子生物学试剂、实验耗材及实验仪器研发、销售、服务为一体的生物科技公司,公司主要经营的进口品牌包括Qiagen, Omega, Sigma, Invitrogen, Roche, Abcam, Santa cruz, FermantasMBI, NEB, BD, Peprotech, Abnova, R&D systerms, GE, Biovision, Millipore, Amresco, Merck, CST, Axygen, Corning, NUNC, Thermo fihser, Eppendorf等;产品涉及化工原料、生化试剂、分子克隆相关试剂、细胞培养及检测常用试剂、实验室常用耗材及仪器。

Western blotting检测试剂盒(DAB) NobleRyder P0910

 

 

Western blotting检测试剂盒(DAB) NobleRyder P0910

 

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