细胞冻存液
细胞冻存液 C0050 NobleRyder 100ml 360.00此主要是由血清和DMSO组成,适合于大多数细胞的冻存,其冻存方法与常规方法相同。
细胞的冻存和复苏
一、细胞冻存液原理
在不加任何条件下直接冻存细胞时,细胞内和外环境中的水都会形成冰晶,能导致细胞内发生机械损伤、电解质升高、渗透压改变、脱水、PH改变、蛋白变性等,能引起细胞死亡。如向培养液加入保护剂,可使冰点降低。在缓慢的冻结条件下,能使细胞内水份在冻结前透出细胞。贮存在-130℃以下的低温中能减少冰晶的形成。
细胞复苏时速度要快,使之迅速通过细胞zui易受损的-5~0℃,细胞仍能生长,活力受损不大。
目前常用的保护剂为二甲亚砜(DMSO)和甘油,它们对细胞无毒性,分子量小,溶解度大,易穿透细胞。
二、细胞冻存液操作步骤
(一)冻存
1、消化细胞(同实验二),将细胞悬液收集至离心管中。
2、1000rpm离心10分钟,弃上清液。
3、沉淀加,轻轻吹打均匀,计数,调整至5×106/ml左右。
4、将悬液分至冻存管中,每管1 ml。
5、将冻存管口封严。如用安瓿瓶则火焰封口,封口一定要严,否则复苏时易出现爆裂。
6、贴上标签,写明细胞种类,冻存日期。冻存管外拴一金属重物和一细绳。
7、按下列顺序降温:室温→4℃(20分钟〕→冰箱冷冻室(30分钟)→低温冰箱(-30℃ 1小时)→气态氮(30分钟)→液氮。
注意:操作时应小心,以免液氮冻伤。液氮定期检查,随时补充,不能挥发干净,一般30立升的液氮能用1~1.5月。
(二)复苏
1、准备一个茶缸或1000ml的烧坏,内装2/3杯37℃的温水。
2、从液氮中取出冻存管、迅速置于温水中并不断搅动。使冻存管中的冻存物在1分钟之内融化。
3、打开冻存管,将细胞悬液吸到离心管中。
4、1000rpm离心10分钟,弃去上清液。
5、沉淀加10ml培养液,吹打均匀,再离心10分钟,弃上清液。
6、加适当培养基后将细胞转移至培养瓶中,37℃培养,第二天观察生长情况。
三、试剂和器材
器材:液氮罐、冻存管(塑料螺口冻存管或安瓿瓶)、离心管、吸管、离心机等
试剂:0.25%胰酶、培养基、含保护剂的培养基(即冻存液)
C0050 NobleRyder 100ml 360.00
此主要是由血清和DMSO组成,适合于大多数细胞的冻存,其冻存方法与常规方法相同。
C0170 | 10×PBS,PH7.2-7.4,10倍浓缩液,液体 | NobleRyder | 500ml | 100.00 |
C0260 | 1M Hepes溶液(细胞培养) | NobleRyder | 125ml | 236.00 |
C0140 | D-Hanks(HBSS)不含钙镁,不含酚红 | NobleRyder | 500ml | 100.00 |
C0130 | D-Hanks(HBSS)不含钙镁,含酚红 | NobleRyder | 500ml | 100.00 |
C0100 | D-PBS(DPBS) | NobleRyder | 500ml | 80.00 |
C0120 | Hanks(HBSS)含钙镁,不含酚红 | NobleRyder | 500ml | 100.00 |
C0110 | Hanks(HBSS)含钙镁,含酚红 | NobleRyder | 500ml | 100.00 |
C0190 | L-谷氨酰氨溶液(L-Glutamine,Liquid)(200mM) | NobleRyder | 125ml | 80.00 |
C0160 | PBS缓冲液(液体)PH7.2-7.4 | NobleRyder | 500ml | 80.00 |
C0200 | 丙酮酸钠溶液(Sodium Pyruvate)100mM | NobleRyder | 125ml | 100.00 |
C0250 | 非必需氨基酸溶液(100×) | NobleRyder | 125ml | 140.00 |
C0240 | 青链霉素混合液(100×) | NobleRyder | 125ml | 80.00 |
C0050 | NobleRyder | 100ml | 360.00 | |
C0210 | 胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%)不含酚红 | NobleRyder | 125ml | 90.00 |
P0220 | 胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%)含酚红 | NobleRyder | 125ml | 90.00 |
C0230 | 胰蛋白酶消化液(0.25%)不含酚红 | NobleRyder | 125ml | 90.00 |
N0080 | 2×HEPES缓冲盐溶液 | NobleRyder | 100ml | 100.00 |