1.适用范围：适合于大量中性福尔马林固定、石蜡包埋组织切片的抗原修复，其效果优于微波修复法和直接煮沸修复法,使得免疫组化结果更加可靠；推荐使用本法.

2.仪器设备：市售不锈钢家用压力锅（以不锈钢制品为好），大小尺寸可根据需要而定（内径18cm为好）；1000-1500W电炉一台；不锈钢或耐高温塑料切片架。

3.所需试剂：0.01M柠檬酸型缓冲液，pH=6.0±0.1

4.操作步骤：

（1）常规组织切片经二甲苯脱蜡、梯度酒精水化后，浸泡于蒸馏水中待用。

（2）取一定量pH=6.0柠檬酸盐缓冲液（800-1500ml）于压力锅中，大火加热直至沸腾；将脱蜡水化后的组织切片置于不锈钢或耐高温塑料切片架上，放入已沸腾的缓冲液中。盖上锅盖，扣上压力阀，继续加热至喷汽，从喷汽开始计时，1-2分钟后，压力锅离开热源，冷却至室温（稍冷后，可在自来水笼头下加速冷却），取出玻片，先用蒸馏水冲洗两次，之后用PBS（pH=7.2-7.4）冲洗两次，每次3分钟（2×3'）。

（3）按公司有关试剂盒的操作步骤执行。

5.注意事项：

（1）加热时间长短的控制很重要，从组织切片放入缓冲液到高压锅离开火源的总时间控制在5-8分钟为好，时间过长可能会使染色背景加深。

（2）必须使用不锈钢或耐高温塑料切片架，不能使用铜架，以防缓冲液pH值增高而导致掉片。

（3）高压锅离开火源后必须等缓冲液冷切后，才能把切片取出。

（4）为防止组织脱落，玻片必须经清洁处理后，涂覆Poly-L-Lysine
（5）缓冲液的量必须保证所有切片都能浸泡到，用过的柠檬酸缓冲液不能反复使用。

常用的消化酶为胰蛋白酶和胃蛋白酶。一般说来，胰蛋白酶消化能力较胃蛋白酶弱，主要用于细胞内抗原的消化，胃蛋白酶主要用于细胞间抗原的消化。工作中要认真参照抗体说明书指示进行消化酶的选择，这样针对性更强，标记效果更理想。

问：为什么要进行抗原修复：

答：福尔马林固定时，组织中的许多氨基酸残基在分子内或分子间形成了醛键，使得不少抗原决定簇被封闭。同时，由于甲醛的聚合作用，使蛋白质分子间相互交联形成大分子网络，也导致了抗原决定簇被掩盖，这就使得相当部分的抗原不能与抗体很好是进行反应。因此，抗原修复也是影响免疫组化染色结果的基本因素。

抗原修复中柠檬酸缓冲液的配制方法：

A液：枸橼酸，C₆H₈O₇.H₂O，21.01g 加水定容至1000ml；

B液：枸橼酸钠，C₆H₅Na₃O₇.2H₂O, 29.41g 加水定容至1000ml;

使用时： A液9 ml, B液41 ml，加水至500ml，即可配成工作液。

抗原修复（Antigen retrieval ，AR）技术，是指石蜡、冰冻、火棉胶、塑料切片免疫组织化学（IHC）前用胰蛋白酶、尿素、表面活性剂、微波缓冲液和金属盐等，使被掩盖的抗原决定簇或变性的抗原重新暴露或抗原性得到一定程度的恢复过程。抗原修复能zui大程度地恢复在制片等过程中损失的抗原性，使原来认为不能在石蜡切片上进行IHC的许多抗体获得了良好的染色结果，成为一种有效的补救措施。本文的目的是概述AR-HIC的发展、应用和标准化。

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