该如何选择判断RIPA裂解液？看看这些吧
更新时间：2020-11-03 点击次数：3135次
你知道该如何选择判断RIPA裂解液么?下面就让我们一起来了解一下吧。
一、如何选择合适的RIPA裂解液?
如果您只是要做普通的WB、IP或者co-IP，我们建议您使用免疫印迹及免疫沉淀用(WB/IP)裂解液(20118)，该裂解液在裂解细胞或组织后一般不会形成粘滞的透明状DNA团块，不必采用超声处理就可进行下一步操作。同时，该裂解液还适用于磷酸化蛋白的WB检测。
如果使用免疫印迹及免疫沉淀用(WB/IP)裂解液(20118)的效果不是很好，那您的蛋白可能比较特殊，我们建议您可以尝试另外几种裂解液。
如果您的蛋白是难溶性的蛋白，建议您可以尝试使用裂解强度更高的裂解液，如RIPA裂解液(强/中);如果您在做IP实验的时候发现背景很高，即有很多非特异性蛋白被IP下来，这时候您需使用裂解强度较强的裂解液，比如RIPA裂解液(强/中)。
反之，如果您发现目的蛋白无法IP下来，则说明您使用的裂解液强度过强，此时需使用裂解强度较弱的裂解液，比如RIPA裂解液(弱)。
二、如何判断细胞的裂解程度?
细胞裂解：加入RIPA后，充分裂解的细胞，没有细胞沉淀，很粘稠。如果像浑浊的水一样粘性很小则可能是裂解液得量加太多导致的;相反，如果RIPA裂解液后出现胶状物体，离心不能沉淀则可能是蛋白太多，RIPA裂解液加入的量太少导致的。
组织裂解：先将组织剪成细小的碎片，之后利用匀浆器或超声破碎的方法，镜检显示细胞破碎率大于90%，同时组织已经*裂解，没有明显的小组织块。之后按照细胞裂解的步骤进行裂解，裂解程度的判断标准与细胞裂解一致。
RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清进行后续实验;如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则需通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子，如NF-κB、p53等时，通常不必进行超声处理，就可以检测到这些转录因子。
